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一,、建立樣品準(zhǔn)備區(qū)

  這個(gè)區(qū)域?qū)ｉT用作樣品的準(zhǔn)備,，在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)該采取預(yù)防措施：

  ⑴PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作,。

  ⑵組織培養(yǎng)物,、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理,，以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。

  ⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,，也不能用作操作靶序列。

  ⑷DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護(hù)或正  壓活塞式移液管操作,，以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留,。

  ⑸大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無菌一次性移液管吸取。

  ⑹管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生,，而且管子不能用力崩  開,，這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。

  ⑺任何時(shí)候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套,，手套要經(jīng)常更換,，尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實(shí)驗(yàn)服要專門用于樣品準(zhǔn)備間,，經(jīng)常清洗。

二,、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。為了避免這一問題,，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行,。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。

三,、建立前PCR區(qū),。該去專門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng)，這個(gè)區(qū)域必須保持干凈,，而且沒有來自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染,。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備，特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管,。

四,、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作。

  ⑴所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染,。

  ⑵所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的－新鮮蒸餾的去離子水,，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌,。

  ⑶在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑,，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。

  ⑷所用試劑都應(yīng)該以大體積配制,，實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意,，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。

  ⑸所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子,。

  ⑹新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn),。

  ⑺樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存,。

五、在前PCR區(qū)建立PCR混合物,。

  ⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好,、分裝并保存在-20℃或4℃，在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用,。

  ⑵如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物,，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分,。

  ⑶作為一個(gè)規(guī)則,，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度,。而且,，你也希望通過使用一個(gè)已知的弱陽性樣品來驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。

  ⑷陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做,，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染,，陰性對照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。

  ⑸當(dāng)做陽性對照時(shí),，有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用少數(shù)量的核酸,。

  ⑹由于必須有對照反應(yīng)，對照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮,。

六,、控制污染的方法。

      已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來消除一種形式的污染—使用UNG,，這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染,。另一種控制污染的方法是使用紫外線，這種方法不能完全消除污染問題,，但可以將污染降低幾個(gè)數(shù)量級(jí),。

七、后PCR區(qū)PCR完成以后,，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù),，應(yīng)該留出一個(gè)專門用于反應(yīng)后處理樣品的 地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑,、一次性耗材和儀器都必須是專門用于這一目的,，決不能把實(shí)驗(yàn)室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動(dòng)。